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样本的收集与处理
ELISA(酶联免疫吸附试验)是一种常用的生物化学分析方法,用于检测和量化样本中的特定抗原或抗体。为了确保实验结果的准确性,样本的收集、处理和保存至关重要。以下是一些常见的ELISA样本类型及其收集和处理方法:
- 血清:全血样品于室温放置1小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
- 血浆:使用抗凝剂,推荐EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于2-8℃,1000×g离心15分钟,取上清即可检测。
- 细胞上清:收集细胞培养液后于2-8℃,1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
- 组织样本:用预冷的1×PBS (pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10分钟,取上清检测。
- ELISA实验数据处理:推荐使用Origin软件对ELISA实验数据进行处理
细胞提取液:贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞;悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的1×PBS(pH=7.4)洗涤3次。每106个细胞中加入150-200μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10分钟,取上清检测。
- 组织样本:用预冷的1×PBS (pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10分钟,取上清检测。
- ELISA实验数据处理:推荐使用Origin软件对ELISA实验数据进行处理
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